細(xì)胞制備：新藥開發(fā)中細(xì)胞擴(kuò)增和污染控制
細(xì)胞制備是藥物開發(fā)高效和一致性的重要基礎(chǔ)和初始環(huán)節(jié)。大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)，以及擴(kuò)大培養(yǎng)中的細(xì)胞傳代，其中一大核心技術(shù)便是污染的控制。賽多利斯創(chuàng)新的細(xì)胞傳代解決方案，助您切實消除污染，簡化工藝流程并提升效率。
為加速藥物開發(fā)進(jìn)程，我們優(yōu)化的產(chǎn)品組合可提高生產(chǎn)力，確保您選擇合適的候選化合物，并縮短進(jìn)入臨床試驗的時間。
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控制污染，以免導(dǎo)致藥物開發(fā)項目終止
污染源可能是細(xì)菌、酵母、霉菌、化學(xué)物質(zhì)、其它生物制劑和/或細(xì)胞系交叉污染。它會影響細(xì)胞的生長、形態(tài)和行為，從而延緩您的項目進(jìn)度。對任何涉及細(xì)胞培養(yǎng)的項目來說，污染是其面對的一大主要挑戰(zhàn)。
細(xì)菌污染
細(xì)菌是最常見的污染物。通常，自來水的細(xì)菌污染物含量是100-1000 CFU/100 mL，但美國材料與試驗協(xié)會（ASTM International）設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)是，在細(xì)胞培養(yǎng)時細(xì)菌污染物含量<10 CFU/100 mL。與其它污染物不同，細(xì)菌污染通常很容易檢測到，因為培養(yǎng)物會不清澈或變混濁，且/或培養(yǎng)基的顏色會發(fā)生變化，提示pH值下降。細(xì)菌在顯微鏡下也很容易看見。
盡管很容易檢測到大多數(shù)細(xì)菌污染，但它仍然會降低您的效率，畢竟您未必會第一時間注意到污染，可能還準(zhǔn)備使用該培養(yǎng)物進(jìn)行后續(xù)的化驗分析。另外，去污也是成本高昂且很耗時的。
為了避免受到細(xì)菌污染：
- 水是您最重要的試劑，所以請務(wù)必使用新生成的超純水
- 悉心看管您的其它試劑，進(jìn)行無菌過濾以消除任何污染的可能性
- 盡可能采用無菌技術(shù)，且僅使用無菌試劑
- 留意一般實驗室?guī)齑?，對其進(jìn)行污染監(jiān)測往往是一大挑戰(zhàn)?
助您免受細(xì)菌污染的工具：
支原體污染
支原體污染很難以防范，因為具有柔性細(xì)胞膜的支原體較?。?.15 μm-0.3 μm），且無細(xì)胞壁，因此很難通過顯微鏡檢測到。此外由于支原體尺寸較小，即使在哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)物內(nèi)增殖到較高濃度，細(xì)胞培養(yǎng)物表面也看不到任何明顯渾濁跡象或其它變化。
在細(xì)胞系消失前，支原體對培養(yǎng)物的污染可能并不明顯。
已污染細(xì)胞的交叉污染是支原體污染的主要來源之一。消除培養(yǎng)物中的支原體污染幾乎不可能；它對大多數(shù)抗生素有抵抗力，可以在未經(jīng)凍存技術(shù)處理的液氮中存活，污染儲存在同一液氮杜瓦瓶中的其它細(xì)胞。
在細(xì)胞培養(yǎng)時使用特異的支原體檢測可以提高您的效率，便于您即刻了解細(xì)胞是否受到污染，以免浪費(fèi)時間、試劑和精力。使用無支原體的培養(yǎng)物可以增大您的實驗結(jié)果轉(zhuǎn)化為臨床的幾率。
細(xì)胞傳代
無論是貼壁細(xì)胞或非貼壁細(xì)胞，所有細(xì)胞在細(xì)胞擴(kuò)增期間最終都需要進(jìn)行傳代或繼代培養(yǎng)。然而傳代會帶來污染風(fēng)險，因為需要打開培養(yǎng)瓶對細(xì)胞進(jìn)行操作，并補(bǔ)充新的培養(yǎng)基和添加劑。所有這些步驟都會增大引入污染物的幾率。采用適當(dāng)?shù)臒o菌技術(shù)、快速操作，并使用最佳工具和未污染試劑，有助于降低在細(xì)胞培養(yǎng)中引入污染物的風(fēng)險。
有助于減少培養(yǎng)物中污染物的工具：
在生物安全柜外進(jìn)行細(xì)胞傳代：既避免引入污染物并提高效率
采用我們創(chuàng)新性細(xì)胞擴(kuò)增系統(tǒng)，您無需打開燒瓶或在層流罩內(nèi)，即可無菌傳代細(xì)胞。為防止在生物安全柜外傳代期間發(fā)生污染，該系統(tǒng)組合采用了無菌液體轉(zhuǎn)移管路和在預(yù)裝配于塑料錐形搖瓶的蓋子中進(jìn)行氣體交換的濾芯。
我們的MYCAP CCX系統(tǒng)和傳統(tǒng)錐形燒瓶中的細(xì)胞生長率基本相同。通過使用接管機(jī)或無菌連接器，在生物安全柜外可以完成燒瓶內(nèi)的培養(yǎng)基灌裝、接種、取樣和轉(zhuǎn)移這些無菌操作。
這些功能可以讓您降低污染風(fēng)險，無需使用備份燒瓶即可提高效率，同時減少多余的傳代工作。此外，您還無需使用生物安全柜，從而降低運(yùn)作成本并簡化操作。
提高液體處理的效率，減少凍存時的細(xì)胞損失
細(xì)胞系是您最寶貴的資源之一，但同時，它們也很脆弱。持續(xù)培養(yǎng)的細(xì)胞系可能因細(xì)胞群的衰老、污染和/或遺傳漂移而有所損失。在液氮中凍存可以保護(hù)細(xì)胞系。然而，冷凍和融解的工藝流程會給這些脆弱的細(xì)胞帶來壓力。儲存于液氮中的細(xì)胞往往通過使用冷凍保護(hù)劑，如二甲亞砜（DMSO）或甘油而受到保護(hù)，免受損害影響。快速操作并使用良好的技術(shù)對降低寶貴細(xì)胞被破壞的可能性也至關(guān)重要。
正確的工具可以幫您快速、高效操作，而錯誤的工具會拖慢您的速度，并增加額外的工序。
您選擇的移液器和移液器吸頭對從種子和所建細(xì)胞系的工作庫存中移取細(xì)胞都有影響。與水溶液的細(xì)胞培養(yǎng)基相比，含冷凍保護(hù)劑的溶液的表面張力更低。例如，最常用于防冷凍的DMSO在20℃時的表面張力約為43 mN/m（而水為73 mN/m）。表面張力低，意味著液體會在移液器吸頭內(nèi)表面形成液膜，難以精確移液。使用合適的移液器吸頭，如采用拋光處理表面的低吸附吸頭，可為您確保細(xì)胞懸液中的冷凍保護(hù)劑達(dá)到正確比例，從而降低冷凍和融解期間破壞細(xì)胞的可能性。
